Gramovo barvení

Jedno ze základních barvení v mikrobiologii. Gramovo barvení dalo základ rozdělení bakterií na Gram pozitivní (G+) a Gram negativní (G−). Toto dělení je založeno na různé stavbě bakteriální stěny.

Postup

Zkoumaný vzorek nebo kulturu bakterií naneseme na podložní sklo a postupně nanášíme barvící roztoky. Každý roztok necháme působit cca 1 minutu. Postup si snadno zapamatujeme podle zkratky VLAS (VLAK):

Gramovo barvení

• krystalová Violeť
• Lugolův roztok
• Alkohol
• opláchnutí vodou
• Safranin nebo Karbolfuchsin

Pozitivita a negativita

G+

Grampozitivní bakterie mají stěnu tvořenou peptidoglykanem a polysacharidy, kterými prochází kyselina teichoová. Při barvení se krystalová violeť dostává do buněk a tvoří s Lugolovým roztokem modrou komplexní barvu. Alkohol není schopný prostoupit buněčnou stěnou a rozpustit komplex. Dobarvení safraninem dodá bakteriím tmavě fialovou barvu.

• G+ koky: Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus;
• G+ bacily: Corynebacterium, Clostridium, Listeria, Bacillus.

G–

Gramnegativní bakterie mají stěnu tvořenou tenkou vrstvou peptidoglykanu a vrstvou lipopolysacharidu. Při stejném postupu dochází ve třetím kroku k vyplavení komplexu alkoholem a k odbarvení. Safranin dobarví bakterie červeně.

• G– koky: Neisseria;
• G– kokobacily: Haemophilus influenzae, Bordetella pertussis, Legionella, Brucella, atd.
• G– bacily: Klebsiella, E. coli, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Vibrio, Pseudomonas, Proteus, Helicobacter pylori, Yersinia, Campylobacter, Salmonella, Bacillus fragilis, atd.

G labilní a nebarvící se

Některé bakterie, zvláště po dlouhé kultivaci a několikanásobném pasážování, nebo pokud přežijí útok antibiotik proti buněčné stěně (L-formy), se mohou změnit z G+ na G–.

Bakterie, které obsahují ve své stěně hodně mastných kyselin a vosků (Mycobacterium tuberculosis), se nemusí barvit podle Grama vůbec.

Odkazy

Související články

• Burriho barvení
• Barvení podle Giemsy
• Barvení Hematoxylin- Eosin
• Barvení chromozomů
• Bakterie

Zdroj

• RYŠKOVÁ, Olga, et al. Návody k praktickým cvičením z lékařské mikrobiologie. 1. vydání. Praha : Karolinum, 1997. ISBN 80-7184-307-5.