Laboratorní vyšetření buněčné imunity
Cílem laboratorních metod vyšetřování buněčné imunity je stanovení základních buněk podílejících se na imunitní odpovědi. Odebírá se periferní krev, používají se imunohistochemické metody.
Morfologické testy[upravit | editovat zdroj]
Pomocí krevního obrazu určíme základní buňky, jejich morfologické defekty a počty. Nejvíce se zajímáme o T-lymfocyty a B-lymfocyty, resp. o jejich subpopulace (liší se membránovými povrchovými znaky). Princip detekce je založen na fluorometrii a fluorescenci. T-lymfocyty mají marker CD3, navážeme tedy monoklonální protilátky proti CD3 a označíme je fluorochromem, promyjeme a navázané detekujeme:
- mikroskopem: pracné, náročné, zatíženo subjektivní chybou,
- průtokovým cytometrem,
- imunohistochemicky: ELISA,
- PCR: v imunologii založena na reverzní transkripci; potřebujeme získat mRNA, která je přítomna v situaci, kdy dochází k reprodukci určitého mediátoru,
- in situ hybridizací: detekujeme mRNA a DNA přímo v buňách; podobné PCR; zda-li je produkován určitý typ mediátoru a kolik; detekce genů v buňkách v mikroskopickém zobrazení (přímo vidíme, co která buňka produkuje).
Funkční testy[upravit | editovat zdroj]
Používají se i testy detekující funkci jednotlivých typů buněk.
- Testy sekrece cytokinů
Detekujeme vlastní antigen (cytokin) imunohistochemicky nebo cytometricky. TH2-lymfocyty produkují především IL-4. Nemají charakteristický membránový znak.
- Testy proliferace antigenu
Míra schopnosti proliferace pomocí mitogenů (např. pokeweed). Nárůst buněčné populace detekujeme cytometricky nebo inkorporací radioaktivního thymidinu, měříme radioaktivitu (čím více thymidinu, tím větší proliferační aktivita).
- Funkční test aktivity neutrofilů
Suspenze leukocytů se smíchá s kvasinkami nebo partikulemi a sleduje se schopnost fagocytózy. Dále lze sledovat intracelulární mechanismy zabíjení. Měříme oxidační aktivitu buněk v suspenzi (změna barvy, uvolňování fotonů), aktivitu enzymů. Lze detekovat i počet fagocytujících partikulí.
Odkazy[upravit | editovat zdroj]
Související články[upravit | editovat zdroj]
- Defekty buněčné imunity
- Nespecifická imunita ▪ Specifická imunita
- T-lymfocyty ▪ B-lymfocyty ▪ Makrofágy ▪ Neutrofily ▪ CD
Použitá literatura[upravit | editovat zdroj]
- HOŘEJŠÍ, Václav a Jiřina BARTŮŇKOVÁ. Základy imunologie. 3. vydání. Praha : Triton, 2008. 280 s. ISBN 80-7254-686-4.