Neurohistologické metody

Průkaz Nisslovy substance

Jako Nisslova substance (tigroid) se označuje granulární endoplazmatické retikulum a ribozomy v těle nervových buněk. Nejvíce je zastoupena v motorických neuronech.

• RNA ribozomů navázaných na granulární endoplazmatické retikulum se barví bazickými barvivy, jako je např. toluidinová modř, thionin a metylenová modř.
• Nejvhodnější metodou fixace je 96% etanol. Výsledkem je tmavě modré až tmavě fialové zbarvení hrudek Nisslovy substance a jadérka, cytoplazma nervových buněk se zbarví světle modře.

ZNÁZORNĚNÍ MYELINU

Myelinová pochva se díky vysokému obsahu fosfolipidů nebarví přehlednými histologickými barvivy jako je hematoxylin-eosin, proto se používají k barvení na myelin speciální metody.

Weigertova metoda

Tkáň se před zaléváním do celoidinu moří tekutinami, které obsahují chrom a měď. Působením těchto solí se myelin stane nerozpustným.

• Ve spojení s hematoxylinem vznikne nerozpustný barevný lak. Výsledkem barvení jsou modročerně zbarvená nervová vlákna s myelinovou pochvou, pozadí reakce je žlutavé.

Luxolová modř

Využívá se pro barvení zmrazených i parafinových řezů.

• Myelinizovaná vlákna se zbarví jasně modře.

Sudanová čerň

Metodu lze využít mimo jiné k průkazu neurodegenerativních chorob, při kterých dochází k strukturálním a chemickým změnám v nervových vláknech.

IMPREGNAČNÍ METODY

V neurohistologii se impregnační metody využívají ke znázornění neurofibril (součást cytoskeletu), nervových zakončení a gliových buněk (podpůrných buněk). Jsou založeny na schopnosti látek obsažených ve znázorňované struktuře redukovat kovy (Os, Ag, Au) z nestabilních roztoků jejich solí. Redukovaný kov v místě znázorněné struktury vytváří tmavá depozita. Vyžadují většinou dlouhodobou fixaci formolem a zmrazené řezy. Jde o poměrně náročné a zdlouhavé metody.

Metoda dle Golgiho

Tato metoda měla mimořádný význam pro poznání základní stavby nervového systému. Při této metodě se impregnují pouze některé neurony, můžeme sledovat detailní větvení dendritického stromu i průběh axonů a nervových drah.

• Bloky nervové tkáně se fixují ve směsi dvojchromanu draselného s oxidem osmičelým a poté se impregnují v roztoku dusičnanu stříbrného.

Metoda dle Bodiana

Slouží k impregnaci nervových vláken CNS i PNS v parafinových řezech pomocí koloidního stříbra (Protargol – proteinát stříbra). K dobarvení jader se používá jádrová červeň.

Impregnace oxidem osmičelým

Využívá ke znázornění myelinových pochev. Dochází při ní k redukci oxidu osmičelého působením lipidů.

ZNÁZORNĚNÍ NEUROGLIE

Neurogliové buňky a jejich typy většinou nelze spolehlivě znázornit základním barvením hematoxylin-eosin. K jejich průkazu se používají speciální barvicí metody, impregnační techniky nebo imunohistochemické metody.

Malloryho fosfowolframový hematoxylin, modifikace dle Andersona

Využívá se roztok sublimátu (HgCl₂), Andersonovo neurogliové mořidlo, což je roztok siřičitanu sodného, kyseliny šťavelové, jodidu draselného a krystalického jódu, a Malloryho fosfowolframový hematoxylin. Gliové buňky a fibrin se znázorní modře, pozadí je růžové.

Impregnace dle Cajala

Používá se zejména k průkazu astrocytů. Tkáň se po fixaci krájí na kryostatu. Glie se impregnuje v roztoku sublimátu a chloridu zlatitého v temnu. Astrocyty jsou znázorněny černě.

Impregnace dle Hortega

Slouží k znázornění mikroglie. K impregnaci se využívá uhličitan stříbrný. Mikroglie má hnědočerné zbarvení.

Imunohistochemický průkaz

Metoda hojně využívaná v současnosti, např. detekce pomocí průkazu GFAP (gliální fibrilární acidický protein).

Odkazy

Související články

• Histochemie

Použitá literatura

• ČÍŽKOVÁ, Kateřina. Základy histochemických metod. - vydání. Univerzita Palackého v Olomouci, 2018. 50 s. ISBN 9788024453163.