Histologický průkaz mikroorganizmů

METODA GRAMM-TWORTH

Barvení umožňuje rozdělit bakterie na grampozitivní (G+) a gramnegativní (G-) a spolu s morfologií (koky, tyčinky apod.) umožňuje jejich základní identifikaci. G+ a G- bakterie se liší stavbou buněčné stěny a její permeabilitou pro barviva.

• G+ i G- se barví krystalovou violetí, která vytváří modrý komplex s roztokem jódu. V dalším kroku se aplikuje aceton.
• Stěna G+ bakterií zůstává po aplikaci acetonu obarvená, zatímco stěna G- bakterií se odbarví. Následuje barvení red/fast green (směs neutrální červeně a fast green v etanolu), který obarví stěnu G- bakterií.
• Výsledkem barvení jsou tedy modré G+ bakterie, červené G- bakterie, jádra buněk okolních tkání jsou červená, kolagen, erytrocyty a cytoplazma buněk jsou obarvené různými odstíny zelené.

GIEMSOVO BARVENÍ

Umožňuje morfologickou identifikaci prvoků a bakterií.

• Využívá se neutrálního barviva vytvořeného smícháním bazického barviva (např. azure B, metylenové modře) s barvivem kyselým (např. eosinem).
• Mikroorganizmy, houby, paraziti jsou modrofialové, jádra jsou modrá, erytrocyty růžové, cytoplazma světle modrá, kolagen, svaly, kosti jsou světle růžové.

ACIDOREZISTENTNÍ BARVENÍ

Mykobakterie (Mycobacterium tuberculosis, M. leprae) nelze prokázat pomocí Grammova barvení. Jejich buněčná stěna obsahuje velké množství voskovitých látek (dlouhé řetězce mykolové kyseliny) způsobujících hydrofobicitu. Mykobakterie jsou acidorezistentní, čili jsou schopné podržet jednou přijaté barvivo a tím odolat odbarvení.

• K barvení se používá koncentrovaný karbolfuchsin aplikovaný za horka. Tímto postupem se obarví všechny přítomné bakterie. Acidorezistentní bakterie poté ale není možné odbarvit kyselým alkoholem.
• K dobarvení neacidorezistentních bakterií a dalších struktur se používá malachitová zeleň. Acidorezistentní bakterie jsou červené, ostatní struktury světle modré až světle zelené.
• K průkazu Mycobacterium tuberculosis (původce tuberkulózy) se používá průkaz podle Ziehl-Neelsona. K průkazu Mycobacterium leprae se používá průkaz podle Fita.

METODA WARTHIN-STARRY (BARVENÍ STŘÍBREM)

Metoda Warthin-Starry se používá k průkazu spirochet (rody Borrelia, Leptospira, Treponema), Legionella, Bartonella a Helicobacter pylori.

• K barvení se používá roztok dusičnanu stříbrného. Buněčná stěna bakterií je schopná vázat stříbrné ionty, ale nedochází k jejich redukci. Redukce stříbrných iontů na kovové stříbro se provádí hydrochinonem.
• Bakterie se obarví tmavě hnědě, pozadí řezu je žluté.

PAS REAKCE

K průkazu hub a améb lze využít i PAS reakci, protože buněčná stěna hub obsahuje velké množství polysacharidů.

• Cytoplazma améb obsahuje glykogen. Principem barvení je oxidace polysacharidů na aldehydy kyselinou jodistou. Aldehydy následně reagují se Shiffovým reagens za vzniku růžového zbarvení.

Odkazy

Použitá literatura

• ČÍŽKOVÁ, Kateřina. Základy histochemických metod. - vydání. Univerzita Palackého v Olomouci, 2018. 50 s. ISBN 9788024453163.