Histochemie

Jedná se o histologickou metodu, při které prokazujeme ve vzorku pomocí chemické reakce přítomnost látek (např. enzymatická aktivita)

Rozdělení

1. Histochemie
   • Perlsova reakce
   • PAS reakce
   • Bestův karmín
   • Feulgenova reakce
2. Katalytická histochemie
   • Průkaz alkalické fosfatázy
3. Imunohistochemie

Perlsova reakce

Perlsova reakce slouží k odlišení lipofuscinu, hematoidinu a hematinu, které jsou Perls negativní. Tato reakce se používá k průkazu hemosiderinu.

• Metodika barvení
  • Složení barvícího roztoku
    1. ferokyanid draselný
    2. destilovaná voda
    3. kyselina chlorovodíková (2%)

Řezy se umístí na 30 minut do barvícího roztoku při teplotě 60°C. Poté jsou řezy vyjmuty z barvícího roztoku a dobarveny jádrovou červení nebo hematoxylinem.

PAS reakce (Periodic Acid Schiff)

Je založena na oxidační reakci kyseliny jodisté (HIO₄) na 1,2 glykolové skupiny, které jsou přítomné na glukózových zbytcích. Vznikají aldehydové skupiny, které reagují s činidlem (Schiffovým reagens) za vzniku nové koplexní sloučeniny, která má purpurovou až kaštanovou barvu.

Struktury které lze touto metodou detekovat, označujeme jako PAS pozitivní (př. glykogen v játrech)

• Metodika barvení
  • Složení Schiffova reagens
    1. pararosanilin
    2. absolutní alkohol
    3. destilovaná voda
    4. pyrosiřičitan sodný
    5. koncentrovaná kyselina chlorovodíková
    6. dithioničitan sodný

Tkáňový řez se oxiduje v 1% kyselině jodisté po dobu 10 minut. Poté je vyjmut opláchnut ve vodě a následuje barvení Schiffovým reagens po dobu 10-ti minut. Nakonec se řez opláchne v destilované vodě a dobarví hematoxylinem (10 minut).

Odkazy

Použitá literatura

MAŇÁKOVÁ, Eva a Alexandra SEICHERTOVÁ. Metody v histologii. 1. vydání. Praha : Karolinum, 2002. 54 s. ISBN 80-246-0230-X.