Rekombinantní DNA: Porovnání verzí
Z WikiSkript
m (zdroj) |
m (+odkaz) |
||
| Řádek 2: | Řádek 2: | ||
*'''Rc-DNA''' molekuly obsahují úseky DNA rozdílných organismů. | *'''Rc-DNA''' molekuly obsahují úseky DNA rozdílných organismů. | ||
*Vytvářejí se '''insercí cizorodé DNA''' do vektoru (= [[bakterie|bakteriální]] '''plazmid''' nebo fág). | *Vytvářejí se '''insercí cizorodé DNA''' do vektoru (= [[bakterie|bakteriální]] '''plazmid''' nebo fág). | ||
*Plazmid ''E. coli'' (tzv. pBR322, měří 4362 bp) má více restrikčních míst, na kterých se dá kruh DNA otevřít specifickými '''restrikčními endonukleasami''' – to umožňuje, aby se úsek cizorodé DNA, rozštěpené tím stejným [[enzym]]em, včlenil do [[plazmid]]u = rekombinoval, a vytvořil tak '''rekombinovaný plazmid'''. | *Plazmid '[['E. coli]]'' (tzv. pBR322, měří 4362 bp) má více restrikčních míst, na kterých se dá kruh DNA otevřít specifickými '''restrikčními endonukleasami''' – to umožňuje, aby se úsek cizorodé DNA, rozštěpené tím stejným [[enzym]]em, včlenil do [[plazmid]]u = rekombinoval, a vytvořil tak '''rekombinovaný plazmid'''. | ||
*Rekombinované plazmidy se znovu vloží do bakterií, které se pak nechají namnožit, pod [[selekce|selekčním]] tlakem, tak je možné vytvořit '''klony bakterií''', které nesou specificky restrikční fragment cizorodé DNA. | *Rekombinované plazmidy se znovu vloží do bakterií, které se pak nechají namnožit, pod [[selekce|selekčním]] tlakem, tak je možné vytvořit '''klony bakterií''', které nesou specificky restrikční fragment cizorodé DNA. | ||
*Příprava rekombinantní DNA začíná pokusem vložit množství více-méně náhodných restrikčních fragmentů do plazmidu, proto je zvlášť rozhodující rozpoznat konkrétní gen, což je možné tehdy, kdy je dostupná příslušná [[mRNA]] – ta se purifikuje a použije se na přípravu cDNA pomocí [[reverzní transkriptása|reverzní transkriptasy]] – výsledkem je radionuklidem značená molekula '''cDNA''' = tzv. '''sonda''' („probe“) – za osobitých podmínek se hybridizuje s genem, o který nám jde. | *Příprava rekombinantní DNA začíná pokusem vložit množství více-méně náhodných restrikčních fragmentů do plazmidu, proto je zvlášť rozhodující rozpoznat konkrétní gen, což je možné tehdy, kdy je dostupná příslušná [[mRNA]] – ta se purifikuje a použije se na přípravu cDNA pomocí [[reverzní transkriptása|reverzní transkriptasy]] – výsledkem je radionuklidem značená molekula '''cDNA''' = tzv. '''sonda''' („probe“) – za osobitých podmínek se hybridizuje s genem, o který nám jde. | ||
Verze z 1. 4. 2011, 18:49
- Uměle syntetizovaná DNA, která vzniká inzercí genu nebo určité části genu jednoho organismu do genomu jiného.
- Rc-DNA molekuly obsahují úseky DNA rozdílných organismů.
- Vytvářejí se insercí cizorodé DNA do vektoru (= bakteriální plazmid nebo fág).
- Plazmid ''E. coli (tzv. pBR322, měří 4362 bp) má více restrikčních míst, na kterých se dá kruh DNA otevřít specifickými restrikčními endonukleasami – to umožňuje, aby se úsek cizorodé DNA, rozštěpené tím stejným enzymem, včlenil do plazmidu = rekombinoval, a vytvořil tak rekombinovaný plazmid.
- Rekombinované plazmidy se znovu vloží do bakterií, které se pak nechají namnožit, pod selekčním tlakem, tak je možné vytvořit klony bakterií, které nesou specificky restrikční fragment cizorodé DNA.
- Příprava rekombinantní DNA začíná pokusem vložit množství více-méně náhodných restrikčních fragmentů do plazmidu, proto je zvlášť rozhodující rozpoznat konkrétní gen, což je možné tehdy, kdy je dostupná příslušná mRNA – ta se purifikuje a použije se na přípravu cDNA pomocí reverzní transkriptasy – výsledkem je radionuklidem značená molekula cDNA = tzv. sonda („probe“) – za osobitých podmínek se hybridizuje s genem, o který nám jde.
- Fágy = bakteriální viry, které mohou infikovat bakterii, rozmnožovat se v ní a zapříčinit lýzu bakteriálních buněk – při tom se do prostředí uvolní potomstvo fága, které může infikovat okolí.
Odkazy
Související články
Zdroj
ŠTEFÁNEK, Jiří. Medicína, nemoci, studium na 1. LF UK [online]. [cit. 2009]. <http://www.stefajir.cz>.
