Zobrazení zdroje stránky Zpracování periferní krve

== <big>Základní postup zpracování periferní krve</big> ==

Pro dobrý výsledek cytogenetického vyšetření je nutno zachovat tento postup:
# '''Odběr krve.''' Periferní krev odebíráme do heparinizované stříkačky ([[heparin]] je účinný antikoagulant – tzn. látka snižující srážlivost krve) v množství asi 3 ml. Jako [[dezinfekční prostředek]], kterým očistíme místo vpichu, použijeme alkohol. Ostatní látky jsou pro buňky toxické a jejich použití by znemožnilo provést vyšetření.
# '''Kultivace.''' Krev dále kultivujeme tři dny v médiu s obsahem [[Fytohemaglutinin|fytohemaglutininu]]. Tato silně imunogenní látka aglutinuje krevní buňky a stimuluje [[lymfocyty]] k dělení.
# '''Použití [[Kolcemid|kolcemidu]].''' Zhruba dvě hodiny před ukončením kultivace je nutno přidat do kultury kolcemid. Kolcemid je vřeténkový jed, který poruší dělicí vřeténko a zastaví tak probíhající dělení v metafázi mitózy.
# '''Hypotonizace.''' Následně suspenzi buněk slijeme do zkumavky, centrifugujeme a slijeme supernatant. Přidáváme hypotonický roztok chloridu draselného. Voda nám postupně začíná prostupovat do nitra buňky, buňka zvětšuje svůj objem a buněčná membrána se postupně ztenčuje. Chromozomy se od sebe vzájemně rozestupují v důsledku velkého objemu buňky.
# '''Fixace.''' Buňky fixujeme směsí methanol – kyselina octová (3:1). Třikrát tento postup opakujeme.
# '''Příprava chromozomových preparátů.''' Suspenzi kápneme na vlhké, čisté a vychlazené podložní sklo. Suspenzi nakapeme z dostatečné výšky, aby došlo k rozrušení buněčné membrány a k uvolnění chromozomů. Po adhezi jsou chromozomy schopny barvení. 

Lymfocyty periferní krve jsou nejčastěji využívaným materiálem, pokud provádíme postnatální vyšetření. Dalším možným materiálem jsou [[Fibroblast|fibroblasty]].

<noinclude>

== Odkazy ==
=== Použitá literatura ===
*{{Citace
| typ = kniha
| isbn = 978-80-246-1880-7
| příjmení1 = Kočárek
| jméno1 = Eduard
| příjmení2 = Pánek
| jméno2 = Martin
| titul = Klinická cytogenetika I
| podnázev = &nbsp;Úvod do klinické cytogenetiky
| vydání = 2
| místo = Praha
| vydavatel = Karolinum
| rok = 2010
| rozsah = 134
}}
</noinclude>

[[Kategorie:Hematologie]]