Barvení ve světelné mikroskopii

Při barvení preparátů pro světelnou mikroskopii se vždy jedná o interakci určitého barviva a některé složky tkáně. Různá barviva obarví tkáně v důsledku afinity ke kyselému nebo zásaditému. Podle toho se nazývají eozinofilní (acidofilní) – pro svou afinitu ke bazickým strukturám v buňkách (např. mitochondrie, lyzosomy, agranulární endoplazmatické retikulum, cytoplazma) a bazofilní – pro svou afinitu k kyselým strukturám (jsou kyselé protože obsahují genetickou informaci tvořenou nukleovými kyselinami) (např. ribozomy, granulární endoplazmatické retikulum a buněčné jádro). Barvení dělíme na přehledné a selektivní.Cílem při barvení preparátů je dosáhnout kontrastu mezi jednotlivými složkami tkáně.

Přehledné barvení

Tímto barvením získáme všeobecné informace o celém preparátu. Mezi barviva přehledného barvení řadíme Hematoxylin-eosin, Wigert van Gieson, Massonovy trichromy a AZAN.

Hematoxylin-eosin (HE)

Barvení HE − ledvina

Jedná se o nejznámější příklad přehledného barvení. Hematoxylin je bazický, eosin je kyselé barvivo. Zatímco hematoxylin barví jádra modrofialově, eosin barví cytoplazmu růžově.

Podrobnější informace naleznete na stránce Barvení hematoxylin-eosin.

Weigert van Gieson

Toto barvivo barví jádra hnědočerně, vazivo červeně a svalstvo žlutě.

Massonův trichrom

Rozlišujeme tři druhy trichromů podle barvy, kterou se obarví kolagenní vazivo. Jádra jsou většinou obarvena hematoxylinem.

Zelený

Ve vazivu rozlišuje kolagenní vlákna (zelená) a elastická vlákna (fialová). Jádra jsou nabarvena tmavě modře. Cytoplazmu buněk barví zelený Massonův trichrom červeně. Dokážeme také dobře rozeznat i erytrocyty, které barví oranžově.

Modrý

Modrý trichom barví vazivo modře a jádra modročerně.

Žlutý

Žlutý trichrom barví vazivo do žluté barvy, jádra do barvy tmavě modré. Dobře rozlišíme také cytoplazmu, která se barví tímto barvivem červeně.

AZAN

Stejně jako modrý trichrom barví kolagenní vazivo modře (často se tato barviva zaměňují), avšak jádra barví červeně.

Selektivní barvení

Selektivní barvení nám v preparátu vyselektuje a označí pouze některé struktury. Můžeme tak například získat přehled o přítomnosti retikulárních či elastických vláken, určit přítomnost kyselých mukopolysacharidů nebo glykogenu. Selektivní barvení patří do skupiny speciálních barviv. Přehled barviv a struktur, které se jimi obarvují:

Mucikarmín

barví hlen

Orcein

elastická vlákna (hnědě)

Alciánová modř

pokud je použita v kyselém pH, tak zbarví kyselé mukopolysacharidy (modrá) (obrázek)

Bestův karmín

glykogen

Szpielmayerův hematoxylin

myelinové pochvy

Kongo červeň

amyloid

Olejová červeň

neutrální lipidy

Sudanová čerň

neutrální lipidy

Odkazy

Související články

Použitá literatura

WAGNER, Filip. Základy barvení [online]. [cit. 2011-10-22]. <http://www.upol.cz/fileadmin/user_upload/LF-kliniky/histologie/studijni_materialy/zaklady_barveni_v_histologii.pdf>.

VAJNER, Luděk. Mikroskopické techniky [přednáška k předmětu Histologie, obor Všeobecné lékařství, 2.lékařská fakulta Univerzita Karlova]. Praha. 21.6.2011.